分子生物工具书之：蛋白质纯化-DNA

▋ DNA 有机体基础知识

人们如今对 DNA 的归纳，多半是通过多重 PCR、real-time PCR 和对稀有事件的研究来透过的，因此高质量有机体 DNA 非常重要。高质量的归纳有机体是获得高质量的下游检测结果的必要有条件。我们须要了解 DNA 有机体子系统的工作基本原理，然后针对在此之后广泛应用考虑最适合的化学出口处理过程。

DNA 有机体常见的过关斩将

● 聚合混合物从而释放出来 DNA● 将 DNA 分子结构与脂质、核糖体、果糖和 RNA 等其他分子结构受控● 保持 DNA 分子结构的可用性

DNA 举例相合异接踵而来的过关斩将也相合异。例如巧克力等食品，其中的掺入外周的氟化物，如果这些氟化物被已有机体的 DNA 可携带上，则可能抑制下游的检测。从革兰氏阳性细菌中的受控 DNA 须要高效的聚合细菌厚厚的肽聚糖细胞内壁。一定要确保你运用于的 DNA 有机体方式能够应付取样接踵而来的疑难。

温馨预设：血清和民间组织取样在运用于前需冷冻保存，以大大降低限制性对 DNA 的严重破坏。在取出一小部分透过 DNA 有机体以后需将冰冻后的血清完全混合。

DNA 有机体基本迭代

DNA 有机体：聚合、结合和灌入

聚合：严重破坏细胞内或民间组织-酵素出口处理-机器严重破坏-去垢剂出口处理

聚合：使核糖体其会或夺去活性-离子去垢剂、加热、还原剂、尿素和砜类-蛋白酵素（如蛋白酵素 K）

聚合：使内源性限制性-水溶性（例如 EDTA）-蛋白酵素（例如 蛋白酵素 K）

结合与灌入：受控 DNA-添加其他脱氧核糖核酸（如 RNA）-添加核糖体 •有机萃取 •醋析 •与固相合表征结合 -金属氧化物上皮细胞内 -卤化物交换圆柱 -静电胶体

结合与灌入：从其他细胞内物质中的受控 DNA 的方式

■ 有机萃取

当丙酮或丙酮: 混合物与细胞内聚合物混合时，会形成两相合：水相合和有机相合。磁性 DNA 分子结构转入磁性相合或「水相合」，而其会的核糖体和其他细胞内碎片则转入有机相合。

■ 醋析

醋可以让核糖体过量，从而降低其磁性，然后其会，其会后的核糖体夺去溶解性从而沉淀；通过离心法添加沉淀的核糖体和细胞内碎片。常用的醋都有都有盐类、乙酸钾或乙酸铵。

■ 与固相合表征结合

绝大多数的 DNA 有机体方式主要依据的基本原理是：通过考虑性地与固相合表征结合, 从而从粗壮聚合物中的有机体 DNA。这类固相合表征都有金属氧化物表征和卤化物交换纤维素。多半来说，运用于固相合表征有机体 DNA 比其他方式用时更短、操作更快速，因为不须要任何有机溶剂，而且可以微型化和自动化从而实现数据处理。

与 DNA 结合的固相合表征类型

金属氧化物上皮细胞内：DNA 会在高电导率离液醋（例如醋酸砜）存在的只能与金属氧化物结合，但是核糖体不会。可以运用于掺入丙酮的灌入液除去醋，然后在低离子强度的溶液（例如 TE 或水）中的洗脱 DNA。

卤化物交换圆柱：有机体的主要基本原理是 DNA 中的带上负电荷的磷酸基团与交换圆柱上带上自由电子的分子结构之间相合互作用。在低醋有条件下，DNA 与表征结合，而核糖体和 RNA（依赖于所用的缓冲液）则被灌入除去。DNA 可以用高醋缓冲液洗脱。

在胶体较厚透过的 DNA 静电受控：许多商品化试剂盒的工作基本原理是运用于静电胶体从溶液中的捕获 DNA。静电胶体可以由金属氧化物等材料制成，DNA 的结合和洗脱依赖于醋电导率或 pH。

DNA 、电导率和可用性

纯的、完整的 DNA 对于许多下游测定至关重要。常用风险评估 DNA 的常用方式是在 260nm 的频率出口处（DNA 在该频率下有最大吸收峰）测定取样吸光度。通过测定 280nm 频率出口处的吸光度，并且计算 260nm 与 280nm 出口处的吸光度之比，可以检测出有机体出口处理过程中的可能运用于到的或残留在取样中的的其他有机氟化物。电子显微镜纤维素和 qPCR 是计算 DNA 电导率并确定制品可用性的替代方式，主要在本指南在此之后关于脱氧核糖核酸定量章节透过详实争辩。

图片举例：普洛麦格